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糞便鈣衛(wèi)蛋白檢測試劑盒操作步驟
2017-02-04 瀏覽次數(shù)：7027
一.樣本采集和儲存
1、采便盒采集新鮮糞便樣本。固體約20g或稀便約20ml（約糞便盒的三分之一）
2、5天內(nèi)4℃保存，5天至1月內(nèi)-20℃保存，1月以上-70℃長時間保存
二.鈣衛(wèi)蛋白試劑盒提取程序
1、定量管螺紋一端插入糞便，使螺紋填滿，插入定量管中并擰緊，確保螺紋被填滿，（約13mg糞便）
2、若樣本為水樣，直接用移液槍吸取13ul（13mg）到定量管，若樣本為粘稠的膠狀便，建議采用電子天平稱量定量
3、擰開定量管另一端，加入650ul樣本提取液（1:50倍稀釋），渦旋震蕩5-10min，直到螺紋上糞便樣本*溶解
4、將震蕩好的萃取液從濾頭處擠出上清，滴入1.5ml EP管內(nèi)，取10ul加入到1500ul孵育緩沖液（150倍稀釋）
三.鈣衛(wèi)蛋白試劑盒ELISA步驟
1、將試劑盒平衡至室溫
2、將96孔板清洗2遍，甩干（注意：洗后不能放置時間過長；可不用洗板操作）
3、分別吸取100ul稀釋后的樣本、標(biāo)準(zhǔn)品及質(zhì)控品
4、用封膜封板，置于水平搖床，18-28°C 孵育30-60分鐘，400轉(zhuǎn)/分鐘
5、清洗4遍
6、每孔均加入100ul酶結(jié)合物
7、用封膜封板，置于水平搖床上，18-28°C 孵育30-60分鐘，400轉(zhuǎn)/分鐘
8、清洗5遍，甩干
9、每孔均加入100ul TMB底物液
10、用封膜封板，置于水平搖床上，避光，18-28°C，孵育15分鐘，400轉(zhuǎn)/分鐘
11、每孔均加入100ul終止液終止
12、用酶標(biāo)儀在450 nm處讀數(shù)（5分鐘內(nèi)）
13、x軸使用濃度值30,90,300,900,1800ug/g，Y軸使用OD值，使用四參數(shù)擬合標(biāo)曲。根據(jù)Y值計算獲得樣本X值
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