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骨保護(hù)素試劑盒說(shuō)明書(shū)

2020-10-09 瀏覽次數(shù):2029

一.骨保護(hù)素試劑盒產(chǎn)品介紹:

骨保護(hù)素(OPG)或破骨細(xì)胞抑制因子(OCIF)是腫瘤壞死因子受體群 11b 的糖蛋白,是有 380 個(gè)氨基 酸分子的合成單體, 在細(xì)胞內(nèi)組合為二聚物,主要 以二硫鍵鏈接二聚物形式分泌到細(xì)胞外腔。骨保護(hù)素由包括成骨細(xì)胞在內(nèi)的細(xì)胞和不同組織生成。骨保護(hù)素是通過(guò) RANKL 誘餌受體對(duì)骨吸收進(jìn)行負(fù)調(diào)控, 這樣就中和了 RANKL 在破骨細(xì)胞生成的作用。骨保護(hù)素也參與血管鈣化的調(diào)控。

 

二.骨保護(hù)素試劑盒應(yīng)用范圍:

1.骨質(zhì)疏松(1,2)

2.局部吸收活性增加的疾?。?-6)

3. 關(guān)節(jié)炎(7,8)

4.治療監(jiān)控(9-11)

5.心血管疾?。?2-17) 

 

三.骨保護(hù)素試劑盒檢測(cè)步驟:

所有試劑和樣本在實(shí)驗(yàn)前要平衡至室溫 (18-24℃)。 標(biāo)記好 STD/SAMPLE/CTRL(標(biāo)準(zhǔn)品/樣本/質(zhì)控品) 的位置。     從鋁箔袋中取出所需數(shù)量的微孔板條。將不使 用的微孔板條放回帶有干燥劑的鋁箔袋在 4℃ (2-8℃)保存,可穩(wěn)定至標(biāo)簽所標(biāo)日期。 


 1)取 ASY 稀釋液(紅蓋)150µl 加入到每孔內(nèi) 2)校準(zhǔn)品/質(zhì)控品/樣本各取 20µl 分別加入到相應(yīng)孔 內(nèi)(復(fù)孔操作),并輕輕晃動(dòng) 3) 每孔內(nèi)加入50µl 抗體(生物素標(biāo)記OPG抗體, 綠蓋),并輕輕晃動(dòng) 4)遮蓋微孔板室溫(18-24℃)下孵育 4 小時(shí) 5)用 300µl 稀釋洗液反復(fù)洗板 5 次,后一次清洗 后,于吸水紙上強(qiáng)拍微孔板以除去殘留的洗液 6)加入結(jié)合物(棕蓋)200µl 至每孔內(nèi) 7)遮蓋微孔板室溫(18-24℃)下孵育 1 小時(shí) 8)用 300µl 稀釋洗液反復(fù)洗板 5 次,后一次清洗 后,于吸水紙上強(qiáng)拍微孔板以除去殘留的洗液 9)加入 TMB 底物(藍(lán)蓋)200µl 至每孔內(nèi) 10)室溫(18-24℃)下避光孵育 30 分鐘 11)加入終止液(白蓋)50µl 至每孔內(nèi)并輕輕晃動(dòng) 12)以 450nm 波長(zhǎng)(630nm 參考值)立即測(cè)定吸 光度 

 

四.骨保護(hù)素試劑盒檢測(cè)原理:

本試劑盒采用夾心 ELISA 檢測(cè)人血清和血漿中 的骨保護(hù)素。添加緩沖液,標(biāo)準(zhǔn)品/樣本/ 質(zhì)控品,將檢測(cè)的抗體(小鼠抗人生物素標(biāo)記 OPG 單克隆抗體)移到預(yù)包被羊抗 OPG 多克隆抗體微量 滴定條中,標(biāo)準(zhǔn)品/樣本/質(zhì)控品中的 OPG 與微孔中 預(yù)包被的抗體結(jié)合,與要檢測(cè)的抗體形成夾心層。 清洗所有非特異性未結(jié)合的物質(zhì)。第二步,結(jié)合物
(鏈霉親和素-HRPO)加入微孔板中,與檢測(cè)抗體反 應(yīng)。再次清洗后,將 TMB 底物加到微孔板中。酶催 化的底物顏色變化與 OPG 數(shù)量呈比例。用酶標(biāo)儀可 以檢測(cè)到顏色變化。用標(biāo)準(zhǔn)品中獲得的值,生成吸 光度(450nm)與標(biāo)準(zhǔn)濃度的劑量反應(yīng)的曲線。OPG 濃度直接從劑量曲線上獲得。 
 
 

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