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一、弓形蟲(chóng)試劑盒用途及檢測(cè)方法簡(jiǎn)述

弓形蟲(chóng)?。═oxopLasmosis）由細(xì)胞內(nèi)寄生的剛地弓形蟲(chóng)引起，患者可能由食用污染的肉食或接觸含有卵囊的貓糞而得病。病原體可通過(guò)胎盤(pán)感染胎兒，導(dǎo)致先天性弓形蟲(chóng)病，引起胎兒死亡或畸形。酶聯(lián)免疫檢測(cè)弓形蟲(chóng)特異性抗體IgM，是鑒定弓形蟲(chóng)病準(zhǔn)確的血清學(xué)方法。

把純化了的弓形蟲(chóng)抗原包被在微孔表面，加入經(jīng)稀釋的患者血清樣品，若其中存在弓形蟲(chóng)IgM抗體，它便與包被的抗原結(jié)合成為抗原-抗體復(fù)合物。用水洗去未結(jié)合物后加入底物和顯色劑，所產(chǎn)生顏色的強(qiáng)度與樣品中的抗體的量成正比。其結(jié)果通過(guò)酶標(biāo)儀在平行檢測(cè)中與臨界校正液和對(duì)照品相比較而得出。

二、弓形蟲(chóng)試劑盒試劑盒的組成

1.抗原包被的微孔板，1塊，96孔；

2.陰性對(duì)照：150μL，1瓶（無(wú)色蓋）；

3.臨界校正液：150μL，1瓶（黃色蓋）；

4.陽(yáng)性對(duì)照：150μL，1瓶（紅色蓋）；

5．洗滌濃縮液（20X）：50ml，1瓶；

6．樣品稀釋液：22ml，1瓶；

7．酶聯(lián)試劑：12ml，1瓶；

8．TMB試劑：11ml，1瓶；

9．終止液（1N HCL）：11ml，1瓶。

三、弓形蟲(chóng)試劑盒的保存和儀器

1．試劑盒在2-8℃下保存；

2．微孔板保存在有干燥劑的密封袋中；

3．試劑盒在有效期內(nèi)是穩(wěn)定的；

4.試劑盒中的試劑在保存或使用期間，應(yīng)避免暴露在熱、陽(yáng)光和強(qiáng)烈光線之中。

*警示與注意:

1.試劑盒的某些材料中可能含有潛在生物危險(xiǎn)的組分,應(yīng)按微生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室有關(guān)生物安全的規(guī)定進(jìn)行操作和處理。

2.試劑盒僅用于實(shí)驗(yàn)室。

3.勿用嘴吸移液管,禁止在樣品和試劑盒試劑操作區(qū)吸煙、吃東西。

4.本試劑盒中的各組分是一個(gè)完整的單位，不同批號(hào)的組分不能混用。

5.本試劑盒試劑中含有防腐劑*，*會(huì)與鉛、銅形成爆炸性的金屬化合物。

處理：用大量水沖洗。

四、弓形蟲(chóng)試劑盒樣品的采集和制備

1.采集血樣并分離血清。

2.采集的樣品在2-8℃下保存7天，冰凍狀態(tài)下可保存6個(gè)月，血清樣品要避免反復(fù)凍融。

五、弓形蟲(chóng)試劑盒試劑制備

1．使用前使所有試劑恢復(fù)至室溫（18-25℃，下同）；

2．制備洗滌緩沖液：按1：19的比例稀釋洗滌濃縮液（20X），即50ml洗滌濃縮液（20X）用蒸餾水或去離子水稀釋至1000ml，已稀釋好的洗滌液在2-8℃下可保存一個(gè)月，用前混勻。

六、弓形蟲(chóng)試劑盒檢測(cè)步驟

1．將所需微孔安全地放在支架上，建議：陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、待檢樣品和臨界校正液按雙孔設(shè)置；

2．按1：40稀釋待測(cè)樣品、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照和臨界校正液。方法是將5μl上述樣品分別加入到200μl樣品稀釋液中，充分混勻；

3．精密吸取100μl稀釋的血清樣品、臨界校正液和對(duì)照品加入相應(yīng)的微孔中；取100μl樣品稀釋液加入到1A位置的微孔內(nèi)，作為空白對(duì)照；輕敲微孔板，去除液體中的氣泡；

4．37℃下溫育30分鐘；

5．溫育完畢，把全部微孔中的液體清除干凈后，用稀釋的洗滌緩沖液（1X）沖洗5次；

6．向每個(gè)微孔中加入100μl酶聯(lián)試劑，輕輕混合10秒鐘；

7．37℃下溫育30分鐘；

8．甩干每個(gè)微孔中的酶聯(lián)試劑，用稀釋的洗滌

緩沖液（1X）沖洗5次；

9．向每個(gè)微孔中加入100μlTMB試劑，輕輕混合10秒鐘；

10．37℃下溫育15分鐘；

11．向每個(gè)微孔中加入100μl終止液終止反應(yīng)；

12．輕輕混合30秒鐘，此步確保所有藍(lán)色全部轉(zhuǎn)為黃色至關(guān)重要；

13．用酶標(biāo)僅在450nm處于15分鐘內(nèi)讀出光密度值。