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一.巨細胞病毒試劑盒的組成

1．抗原包被的微孔板：96孔，1塊

2．酶聯(lián)試劑：12mL，1瓶，(紅色液體)

3．樣品稀釋液：22mL，1瓶，(綠色液體)

4．陰性校正液：0IU/mL l50μL，1瓶(無色蓋)

5．臨界校正液：1.2IU/mL 150μL，l瓶(黃色蓋)

   CMV IgG指數(shù)=1.0

6．陽性校正液：6IU/mL，150μL，1瓶，(紅色蓋)

7．陽性校正液：18IU/mL，150μL，1瓶，(綠色蓋)

8．陰性對照：范圍見瓶簽，150μL/瓶(藍色蓋)

9．陽性對照：范圍見瓶簽，150μL/瓶，(紫色蓋)

10．洗滌濃縮液(20X)：50mL，1瓶

11．TMB試劑(一步)： 11mL，1瓶

12．終止液(1N  HCL)：11mL，1瓶

二.巨細胞病毒試劑盒的保存和儀器

1．試劑盒在2—8℃下保存。

2．微孔板保存在有干燥劑的密封袋中。

3．試劑盒在有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。

4．試劑盒中的試劑在保存或使用期間，應(yīng)避免暴露在熱、陽光和強烈光線之中。

三、巨細胞病毒試劑盒樣品的采集和制備

1．采集血樣并分離血清。

2．采集的樣品在2-8℃下可保存7天。冰凍狀態(tài)下可保存6個月。血清樣品要避免反復(fù)凍融。

四、巨細胞病毒試劑盒稀釋的試劑的準備

1．制備好稀釋的洗滌緩沖液：按1：19的比例稀釋洗滌濃縮液(20X)，即50mL洗滌濃縮液(20X)用蒸餾水或去離子水稀釋至1升。已稀釋好的洗滌液在2-8℃下可保存一個月，用前混均。

2．使全部樣品和試劑達到室溫(18-25℃，下同)。

五、巨細胞病毒試劑盒檢測步驟

1．從酶標板上拆下所需數(shù)量的板條，再固定在支架上。建議：待測樣品、陰性對照、陽性對照和臨界校正液按雙份設(shè)置。

2．按1：40稀釋待測樣品、陰性對照、陽性對照臨界校正液。方法是將5μL上述樣品分別加入到200μL樣品稀釋液中，充分混勻。

3．取100μL稀釋的血清樣品、臨界校正液和對照品加入到相應(yīng)的微孔中。并取100μL樣品稀釋液加入到lA位置的微孔內(nèi)，作為空白對照，輕敲微孔板，去除液體中的氣泡。37℃下溫育30分鐘。

4．溫育完畢，把全部微孔中的液體清除干凈后，用稀釋的洗滌緩沖液(1X)沖洗5次。

5．向每個微孔中加入100μL酶聯(lián)試劑，輕輕混合10秒鐘，37℃溫育30分鐘。

6．甩干微孔中的酶聯(lián)試劑，用稀釋的洗滌緩沖液(1X)沖洗5次。

7．向每個微孔中加入100μLTMB試劑，輕輕混合10秒鐘。37℃溫育15分鐘。

注意：如無酶標儀，可在第七步加入TMB試劑，37℃溫育15分鐘后，觀察顏色變化，對比患者

樣品的顯色與臨界校正液的顯色深淺進行判斷。

8．向上述微孔中加入100μL終止液(1N HCL)終止反應(yīng)。輕輕混合30秒鐘。此步對確保全部藍色*轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色十分重要。

9．用酶標儀在450nm處于15分鐘內(nèi)讀出每個微孔中液體的O.D.值。