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1、IGF-1試劑盒臨床意義

類胰島素生長因子-1（IGF-1）是一由70個(gè)氨基酸分子組成的多肽（分子量為7650道爾頓），它是胰島素循環(huán)過程中眾多相關(guān)類胰島素生長因子中的一種。此分子與前胰島素大約有50%的同源性，并且它有很多與胰島素相似的生物學(xué)功能。此多肽具有高度的生長激素（GH）依賴性，但也越來越表現(xiàn)出GH非依賴性分泌。IGF-1有很多促進(jìn)生長的功能，包括促進(jìn)細(xì)胞分裂和軟骨的硫酸化,它也可顯示出骨的更新速度。循環(huán)中的IGFP-1幾乎有95%以上都結(jié)合到特異性IGF結(jié)合蛋白（目前知道它有六個(gè)亞種）上。BP3是IGF-1的主要結(jié)合蛋白，它與IGF-1及一個(gè)酸性易變亞基一起形成一分子量為140000道爾頓的三元絡(luò)合物。

2、IGF-1試劑盒臨床應(yīng)用

血清IGF-1的檢測(cè)在小孩生長紊亂及支端肥大癥的診斷和治療檢測(cè)中具有重要意義。IGF-1的濃度會(huì)隨人的年齡、營養(yǎng)狀態(tài)、身體結(jié)構(gòu)和生長激素的分泌而發(fā)生變化。IGF-1的檢測(cè)有利于身材矮小兒童的評(píng)價(jià)和惡性疾病病人的營養(yǎng)學(xué)研究。在支端肥大癥的診斷中，IGF-1的檢測(cè)與隨機(jī)GH的檢測(cè)相比，前者更具有可靠性。

3、前言說明

類胰島素生長因子1試劑盒為血清IGF-1的定量檢測(cè)提供了其所需材料。此檢測(cè)試劑盒僅供提外診斷用。

4、實(shí)驗(yàn)原理

IGF-1 600ELISA試劑盒是一種固相的酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)，采用爭競法的原理。實(shí)驗(yàn)開始前將病人樣品、標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品先酸化和中和好。包被板的微孔中包被了單克隆抗體，這種單克隆抗體對(duì)IGF-1分子上的某單一抗原位點(diǎn)具有特異性。將預(yù)先處理好的樣品與酶聯(lián)物（生物素標(biāo)記的IGF-1）在室溫下溫育。之后洗板，再加入酶復(fù)合物（辣根過氧酶標(biāo)記的鏈親和素）并溫育。加入底物溶液后，溶液所顯示的顏色強(qiáng)度與病人樣品中IGF-1的濃度成反比。

5、實(shí)驗(yàn)所需器材（但試劑盒不提供）

1. 酶標(biāo)儀
2. 移液器
3. 吸水紙
4. 蒸餾水
5. 1.5ml的反應(yīng)杯（用于樣品的準(zhǔn)備）
6. 通用的指示紙

6、的儲(chǔ)存與穩(wěn)定性

   未開啟的試劑在2—8℃下貯存，在有效期內(nèi)可以保持活性。不要使用過期試劑。開封了的試劑必須儲(chǔ)存于2-8℃的環(huán)境下。微孔反應(yīng)板也必須在2—8℃下貯存。一旦包裝袋被打開，必須將它小心地嚴(yán)封起來。拆開包裝后，包被的微孔反應(yīng)板的免疫活性可在約6周內(nèi)保持穩(wěn)定，但必須密封在裝有干燥劑的袋子里。

7、樣本

血清可以用于此實(shí)驗(yàn)，注意：據(jù)觀察，血漿中的IGF-1濃度明顯降低。切勿使用溶血、黃疸或脂血樣品。請(qǐng)注意：含疊氮鈉的樣品不能用于此實(shí)驗(yàn)。

樣品的采集

血清：靜脈穿刺采集全血，待其凝血，室溫下離心獲取血清。在樣品未*凝結(jié)前請(qǐng)勿離心。接受了抗凝血治療病人的樣品可能需要更長的凝血時(shí)間。

樣品的儲(chǔ)存：

樣品應(yīng)當(dāng)立即檢測(cè)。如果實(shí)驗(yàn)前想要將樣品存放更長的時(shí)間，則應(yīng)將樣品凍存于-20℃的環(huán)境下。解凍的樣品在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)反復(fù)倒置幾次。

樣品的稀釋：

在*實(shí)驗(yàn)時(shí)，如果血清樣品中IGF-1的濃度高于zui高標(biāo)準(zhǔn)品中IGF-1的濃度，則應(yīng)將此樣品用零標(biāo)準(zhǔn)品稀釋，并按實(shí)驗(yàn)步驟重新檢測(cè)。在計(jì)算濃度時(shí)應(yīng)當(dāng)將此稀釋因子考慮進(jìn)去。

例如：

• 按1：10的比例稀釋：10μl的血清+90μl零標(biāo)準(zhǔn)品（充分混合）
• 按1：100的比例稀釋：10μl已稀釋好的a）+90μl零標(biāo)準(zhǔn)品（充分混合）
•  

8、病人樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的酸化與中和

1. 在1.5ml的反應(yīng)Caps中加入200μl樣品、標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控孔。請(qǐng)注意：按照下列所述步驟，標(biāo)準(zhǔn)品既要進(jìn)行酸化，也要進(jìn)行中和。
2. 在加入20μl 1M的HCl
3. 混合并溫育15min
4. 向所有的Caps中加入20μl 1M的NaOH進(jìn)行中和，混合溶液。
5. 中和之后的pH值應(yīng)該是7到8之間，請(qǐng)用通用指示紙檢測(cè)pH值。

9、類胰島素生長因子1試劑盒成分

1. 1M的HCl ，1支，3ml，即用，用于樣品的酸化。
2. 1M的NaOH，1支，3ml，即用，用于中和。
3. 包被板，12×8（可拆），96孔，包被孔中包被了抗IGF-1抗體（單抗）
4. 標(biāo)準(zhǔn)品（標(biāo)準(zhǔn)品0-6），7支，1ml，濃度：0；5；10；50；150；300；600ng/ml。NIBSC編號(hào)：87/518，轉(zhuǎn)換系數(shù)：1ng/ml×0.13=nmol/l。內(nèi)含0.03%的Proclin300和0.005%的慶大霉素硫酸鹽做為防腐劑。
5. 酶聯(lián)物，1支，14ml，即用，生物素標(biāo)記IGF-1，內(nèi)含0.01%的甲基異噻唑酮，0.02%的BND防腐劑。
6. 酶復(fù)合物，1支，20ml，即用，HRP標(biāo)記的鏈親和素復(fù)合物。
7. 底物液，1支，14ml，即用，TMB
8. 終止液，1支，14ml，即用，內(nèi)含0.5M的H2SO4。避免接觸終止液，以免著燒或刺激皮膚。
9. 洗滌液，1支，30ml（40倍濃縮）

注意：用于樣品稀釋的零標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)視需要而定。